雙熒光素酶報告基因實驗 * 技術原理
熒光素底物在熒光素酶作用下會發光，且光強度能反應熒光素酶的蛋白表達量。而熒光素酶的蛋白表達量，又和啟動子活性、mRNA的穩定性及翻譯效率等有關。利用這個特點，將待測啟動子、UTR等序列與熒光素酶ORF框融合表達，再檢測其發光強度，就能判斷這些序列對蛋白表達的影響。這就叫熒光素酶報告基因檢測。為了減少實驗誤差，一般會同時轉染一個能穩定表達熒光素酶的質粒作為內參，所以叫雙熒光素酶報告基因檢測。
輝駿生物10年科研服務經驗，專業提供分子互作實驗服務，包括蛋白與蛋白、蛋白與DNA、蛋白與RNA、RNA與RNA的相互作用技術，經驗豐富，實驗結果穩定、可靠。
我公司自有分子、細胞和蛋白實驗平臺，能執行最優的實驗路線。
我們不僅會提供專業的售前方案建議、而且售后技術支持將一直保持到文章發表，確保您安心進行下游實驗及投稿。
目前，客戶已在Nature子刊、Oncogene、Cell Research等高水平期刊成功發表大量高分文章（點擊查看客戶文獻）。
雙熒光素酶報告基因實驗 * 技術流程
圖一：啟動子活性分析示意圖
圖二：啟動子和轉錄因子互作分析示意圖
雙熒光素酶報告基因實驗 * 應用背景
雙熒光素酶報告基因分析通常以螢火蟲熒光素酶為報告基因，以海腎熒光素酶為內參基因。所構成的報告系統具有靈敏度高、動態范圍廣、應用靈活等優勢，廣泛應用于基因調控、非編碼RNA靶向互作等研究領域。
輝駿生物根據以下兩種應用制定不同的實驗方案，可針對客戶情況提出合適的建議>>
1. 檢測啟動子活性；
2. 檢測轉錄因子與目標啟動子的相互作用。
雙熒光素酶報告基因實驗 * 服務信息
| 服務項目 | 服務內容 | 結果交付 | 實驗周期 | 客戶提供 | 價格 |
| 啟動子活性分析 | 合成和構建2kb啟動子熒光素酶載體 | 載體質粒、甘油菌 測序結果和實驗報告 | 5-6周 | 待測細胞及其培養方法 實驗信息表 |
|
| 構建不同截短啟動子的熒光素酶載體 | 載體質粒、甘油菌 測序結果和實驗報告 |
| 細胞培養和雙熒光素酶檢測 | 檢測數據和實驗報告 |
| 啟動子與轉錄因子結合驗證 | 構建野生型和突變型啟動子的熒光素酶載體
| 載體質粒、甘油菌 測序結果和實驗報告 | 5-6周 | 待測細胞及其培養方法 轉錄因子基因質粒模板及其原始測序文件 實驗信息表 |
|
構建轉錄因子表達載體
| 載體質粒、甘油菌 測序結果和實驗報告 |
| 細胞培養和雙熒光素酶檢測 | 檢測數據和實驗報告 |
雙熒光素酶報告基因實驗 *?送樣要求
| 樣本類型 | 建議送樣量 |
| 目的基因模板 | 質粒約2ug，或甘油菌約100ul |
| 待測細胞 | （廣州市內客戶）可接受活細胞，2個T25瓶，細胞匯合度＞80%； （其他地區客戶）凍存細胞2管。 |
雙熒光素酶檢測啟動子活性研究案例—客戶文章解析
Tang W.W. et al: The p300/YY1/miR-500a-5p/HDAC2 signalling axis regulates cell proliferation in human colorectal cancer.?
Nature Communications. 2019, IF=12.121.
P300/YY1/miR-500A-5p/HDAC2信號軸調節結直腸癌癌細胞增殖
研究概述
結直腸癌(CRC)是全球癌癥相關性死亡的主要原因之一，復發率和轉移率較高。闡明CRC發生和轉移的機制將有助于尋找新的診斷生物標志物和開發有效的治療干預措施。本研究發現miR-500a-5p在結直腸癌組織中下調，miR-500a-5p水平受到YY1/p300/HDAC2轉錄復合體的協同調控。此外，miR-500a-5p還通過直接結合HDAC2的3’UTR來抑制結直腸癌細胞增殖和遷移。
研究路線
細胞和臨床樣本分析顯示miR-500a-5p在CRC中低表達且與其惡行發展有關
熒光素酶等實驗證明介導CRC細胞增殖的HDAC2是mR-500a-5p靶標
熒光素酶和ChIP-qPCR等實驗證明YY1可以結合miR-500a-5p啟動子并負調控其表達
Co-IP、ChIP等實驗表明miR-500a-5p水平還受到YY1/P300HDAC2復合體的調控
小鼠模型實驗確定miR-500a-5p表達可顯著抑制胂瘤發展
輝駿實力
實驗熱線：4006991663
