cDNA克隆技術實驗原理

基因調取和基因合成均是體外獲取目標基因的方法。

基因調取：從細胞或組織中提取總DNA或總RNA后擴增出目的基因；該方法獲得的基因是天然存在的，但由于個體差異，調取到的基因可能存在SNP，即調取到的序列與NCBI等數據庫登錄序列不完全一致。另外，當樣本中目的基因含量較低時，可能調取不成功。

全基因合成：通過化學合成的方法獲得目的DNA序列。該方法簡單，快速，并且可以保證合成后的序列與您要求的序列完全一致，但當片段太長時，合成費用也相對較高。

cDNA克隆實驗流程

1. 引物設計與合成

2. RNA提取和反轉錄

3. 以cDNA為模板，采用設計好的引物進行PCR，回收目的片段

4. 連接載體，轉化大腸桿菌細胞，進行菌落PCR驗證、酶切驗證和測序

5. 測序結果分析和出具報告

基因調取/合成cDNA克隆服務信息

項目名稱

客戶提供

結果交付

實驗周期

價格

基因調取、合成

目標基因序列
其他實驗要求

1、基因載體質粒約3ug
2、基因載體甘油菌1ml
3、原始測序文件和拼接文件

4、實驗報告（全基因合成無報告）

2-4周

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18927549347

**基因調取/合成服務優勢*輝駿生物**

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基因調取/合成檢測服務—客戶文章

Fu X.Q. et al: Activation of STAT3 is a key event in TLR4 signaling-mediated melanoma progression. Cell Death Dis. 2020, IF= 8.469.

【研究內容】：本研究利用基因表達/敲除、細胞功能檢測，動物實驗，雙熒光素酶分析等實驗，發現人黑色素瘤中TLR4的表達與STAT3的激活/磷酸化呈正相關，TLR4配體通過MYD88和TRIF激活黑色素瘤細胞中的STAT3，促進了腫瘤的生長。當抑制黑色素瘤中STAT3的功能時，TLR4激活產生的效應減弱，說明STAT3激活對TLR4信號介導的黑色素瘤發展至關重要，為黑色素瘤的病理生理學提供了新的線索。

使用技術：基因調取、載體構建

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Cai X.D. et al: LncRNA ILF3-AS1 mediated the occurrence of epilepsy through suppressing hippocampal miR-212 expression. Aging-US. 2020, IF=5.682.

【研究內容】：本研究通過基因過表達、雙熒光素酶等實驗發現LncRNA ILF3-AS1在顳葉癲癇（TLE）患者的海馬和血清中水平升高，ILF3-AS1通過靶向miR-212誘導炎性細胞因子和MMP3、MMP9的表達。值得注意的是，針對ILF3-AS1/miR212/MMP3/9軸的治療策略可能是治療TLE的有效方法。

使用技術：載體構建實驗、基因調取服務、cDNA克隆服務

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Rui Y.J. et al: Disruption of MDA5 mediated innate immune responses by the 3C proteins of Coxsackievirus A16, Coxsackievirus A6, and Enterovirus D68. J Virol. 2017, IF= 5.103.

【研究內容】：柯薩基病毒A16 (CV-A16)和A16 (CV-A6)，以及腸病毒D68 (EV-D68) 是手足口病（HFMD）和26種小兒呼吸道疾病的主要病因。作者通過基因表達、雙熒光素酶和免疫共沉淀（Co-IP）等實驗發現，這三種病毒的3Cpro蛋白可以與宿主的線粒體抗病毒信號蛋白競爭結合MDA5，從而抑制MDA5下游的RLR信號通路中關鍵因子I型干擾素（IFN）的產生；此外，它還能降解NF-κB信號通路中的關鍵因子TAK1而導致NF-κB失活。本研究揭示了這三種病毒破壞宿主先天免疫應答的新機制。

使用技術：基因調取及表達實驗外包、載體構建技術

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