GST pull down技術是體外條件下研究蛋白質相互作用的方法。先將體外表達的GST融合蛋白結合到谷胱甘肽Beads上，再將靶蛋白-GST-Beads和動物、植物或微生物樣本裂解液孵育，這樣互作蛋白便一起吸附在Beads上。洗滌掉未結合的蛋白后，再用洗脫液將互作蛋白復合物從Beads洗脫下來，即GST pull down產物。這種互作復合物既可以用Western Blot檢測已知蛋白，也可用質譜鑒定出未知蛋白。

GST pull-down * 實驗流程

GST pull-down * 應用背景

聯系技術支持

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GST pull-down * 輝駿服務內容

服務項目	服務內容	結果交付	實驗周期	客戶提供	價格
GST pull down WB （驗證型）	誘餌蛋白原核表達載體構建（選做）	載體質粒、測序結果和實驗報告	3-4周 （不含載體構建）	誘餌基因質粒模板 實驗樣本 待測蛋白抗體 實驗信息表	點擊詢價
	誘餌蛋白原核表達和Western blot檢測	誘餌蛋白Western blot檢測圖
	樣本中待測蛋白的Western blot檢測	待測蛋白Western blot檢測圖
	GST pull down捕獲誘餌蛋白及其互作蛋白 （實驗組、空載對照組）	誘餌蛋白Western blot檢測圖 pull down實驗報告
GST pull down  MS （篩選型）	誘餌蛋白原核表達載體構建（選做）	載體質粒、測序結果和實驗報告	5-6周   （不含載體構建）	誘餌基因質粒模板 實驗樣本 實驗信息表	點擊詢價
	誘餌蛋白原核表達和Western blot檢測	誘餌蛋白Western blot檢測圖
	GST pull down捕獲誘餌蛋白及其互作蛋白 （實驗組、GST對照組、裂解液對照組）	誘餌蛋白Western blot檢測圖 pull down實驗報告
	LC-MS/MS檢測及數據分析	質譜檢測結果及報告 互作蛋白篩選表格 生物信息學分析結果和報告

GST pull-down * 樣本要求

樣本類型	GST pull down WB建議送樣量	GST pull down MS建議送樣量
動物細胞	3*10e7個細胞/組（約3個10cm皿）	5*10e7個細胞/組（約5個10cm皿）
動物組織	1g/組	2g/組
植物葉片	2g/組	4g/組
植物根或果實	4g/組	8g/組
菌體	50ul菌體沉淀/組	100ul菌體沉淀/組

▲注意：這里列出的均為每組樣本的送樣量，如果實驗和對照組用的樣本一致，此樣本量*2。詳細送樣指南可聯系輝駿生物客服或銷售索取。

 保存及運輸：-80℃保存，干冰取樣/運輸，至少在送樣前2天通知我司。

GST pull-down * 結果示例

GST pull down WB結果圖（陽性）

GST Pull-down MS：Western blot檢測圖

GST pull-down MS：質譜檢索表格（部分展示）

GST pull-down MS：互作蛋白生信分析結果（部分展示）

聯系技術支持

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GST pull-down服務案例—客戶文章解析

Chen S.L. et al:  A GYS2/p53 Negative Feedback Loop Restricts Tumor Growth in HBV-Related Hepatocellular Carcinoma. Cancer Research. 2018. (中科院1區，IF=13.312).

GYS2/p53負反饋環抑制HBV相關性肝細胞癌的腫瘤生長

研究概述

糖代謝異常是癌癥的突出特征，作者前期研究發現肝細胞癌(HCC)中糖原含量降低，并與患者總體生存情況不良相關，探索HCC中的異常糖代謝機制或許可以為肝細胞癌的治療提供新靶點。本研究首次報道了HCC組織中的糖原含量顯著降低，并與患者的不良預后相關，這歸因于新發現的HBx/GYS2/p53信號軸。低表達的GYS2促進HCC細胞增殖而非遷移，并提供了兩條獨立的證據來支持GYS2和p53之間的關系。一方面，GYS2與MDM2競爭結合p53，以穩定p53免于蛋白酶體降解；另一方面，p53以負反饋方式抑制GYS2表達和糖原含量。這些數據表明p53和GYS2可能通過平衡彼此的表達而在HCC中發揮功能。

研究路線

GST pull down服務 * 客戶文章

1. DSS1 inhibits autophagy to activate epithelial-mesenchymal transition in a pro-metastatic niche of renal cell carcinoma. 2025. Nature Communications.  1區, IF=14.7. 【研究內容】：本研究發現：在轉移性透明細胞腎細胞癌（ccRCC）中，BRCA2在參與DNA修復時的關鍵輔因子DSS1蛋白表達上調，并促進了該腫瘤的生長和遠處轉移。Co-IP和GST pull down證實DSS1與LC3相互作用，通過TRIM 25介導的K63連接的LC3B-K51處的多聚泛素化，促進其降解。這損害了（宏觀）自噬通量并導致p62積累，從而穩定TWIST1并促進其核轉位，最終激活上皮-間充質轉化（EMT）。 使用相關技術: GST Pull-down WB、GST pull down實驗服務

2. Yu C.P. et al: Flot2 acts as a novel mediator of podocyte injury in proteinuric kidney disease. 2023. Int J Biol Sci. 1區, IF=10.75. 【研究內容】：足細胞損傷是慢性腎臟疾病(CKD)的常見標志。本研究證實Flot2在足細胞中表達，且能減少足細胞損傷。在LPS/ADR誘導腎病小鼠模型中，足細胞特異性Flot2的缺失會加重蛋白尿、足細胞損傷和腎小球病變。通過GST pull down和Co-IP實驗，發現Flot2和podocin通過SPFH結構域直接相互作用。同時還發現Flot-2是轉錄因子KLF15的直接靶點。 使用相關技術: GST pull down實驗、免疫共沉淀Co-IP

3. Chen S.L. et al: A GYS2/p53 Negative Feedback Loop Restricts Tumor Growth in HBV-Related Hepatocellular Carcinoma. 2018. Cancer Research. 1區, IF=13.312. 【研究內容】：糖原合成酶2(GYS2)在HCC中的表達明顯下調，并與糖原含量降低和不良患者預后相關。本研究利用Co-IP和GST pull down等方法證明GYS2與MDM2競爭性結合，阻止MDM2介導的p53泛素化和降解；GYS2還增強了p300誘導的p53蛋白K373/382位點的乙酰化，進而負反饋抑制了HBx/HDAC1復合物支持下的GYS2轉錄，從而限制乙肝病毒相關性肝癌的生長。 使用相關技術: GST 融合蛋白、GST pulldown實驗、GST pull-down技術

4. NOD2 reduces the chemoresistance of melanoma by inhibiting the TYMS/PLK1 signaling axis. 2024. Cell Death Dis. 1區, IF=9.6 【研究內容】：核苷酸結合寡聚化結構域2（NOD2）是一種免疫傳感器，對引發先天性免疫反應至關重要。本研究發現NOD2有抑制黑色素瘤的作用。NOD2通過促進胸苷酸合成酶（TYMS）的K48泛素化修飾來抑制其表達，從而降低黑素瘤細胞對5-氟尿嘧啶（5-FU）和卡培他濱（CAP）的抗性。TYMS能與Polo樣激酶1（PLK1）形成蛋白復合物并激活PLK1信號通路。PLK1抑制劑volasertib（BI6727）與5-FU或CAP聯合使用能抑制黑素瘤細胞的增殖、遷移和自噬。 使用相關技術: GST Pull-down WB，GST pulldown wb技術，GST pulldown實驗

5. You H. J. et al: Hepatitis B virus X protein promotes vimentin expression via LIM and SH3 domain protein 1 to facilitate epithelial-mesenchymal transition and hepatocarcinogenesis. Cell. 2021. Commun Signal. 2區, IF=8.4. 【研究內容】：波形蛋白（vimentin）在乙肝病毒X（HBX）陽性的肝癌細胞和HBV相關肝細胞癌（HCC）組織中的表達均升高。機制研究表明，HBX能夠通過LASP1增強了vimentin的表達。一方面，PI3-K、ERK和STAT3信號通路參與了LASP1介導的vimentin上調。另一方面，GST pull down方法確定了HBX直接與vimentin和LASP1相互作用，保護vimentin免受泛素化介導的蛋白降解，促進Vimentin蛋白的穩定性。 使用相關技術: GST-pull down實驗，gst pull down-ms實驗，LC-MS/MS蛋白質譜鑒定

6. Wang J. et al: ENO1 Binds to ApoC3 and Impairs the Proliferation of T Cells via IL-8/STAT3 Pathway in OSCC. 2022. Int J Mol Sci. 2區, IF=6.208. 【研究內容】：α-烯醇化酶(ENO1)是一種代謝酶，與口腔鱗狀細胞癌(OSCC)淋巴轉移有關。本研究通過GST pull down MS尋找與轉移性OSCC患者術后淋巴引流液（PLD）中的ENO1相互作用的蛋白，發現了ENO1的新互作蛋白ApoC3。兩者的結合引起白細胞介素(IL)-8的產生，進而激活Jurkat T細胞STAT3信號通路，促進細胞凋亡，抑制Jurkat T細胞增殖。 使用相關技術: GST pull-down MS實驗，gst pulldown實驗，LC-MS/MS質譜鑒定

輝駿生物提供的GST Pull down實驗技術服務分為以下兩種：

1. GST Pull down WB，用于體外檢測誘餌蛋白與某樣本中的待測蛋白是否存在相互作用；

2. GST Pull down MS，用于體外篩選誘餌蛋白與某樣本中的哪些蛋白具有相互作用。

聯系技術支持了解pull down實驗服務排期、優惠等

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GST pull down技術服務優勢*輝駿生物

GST pull down實驗服務樣本要求

1. 送樣量要求

▲注意：這里列出的均為每組樣本的送樣量，如果實驗和對照組用的樣本一致，此樣本量*2。詳細送樣指南可聯系輝駿生物客服或銷售索取。

2. 樣本保存和運輸要求：

（1）樣本用PBS清洗干凈后，離心去掉液體，先放入液氮中速凍，再轉移至-80℃冰箱中保存；

（2）樣本一定要做好標記，應用油性防凍記號筆或標簽紙在管上注明樣本名稱或編號；

（3）樣本較多或需要分批做，要將樣本分裝；

（4）干冰取樣/運輸；需要至少在送樣前一天通知我方。

GST pull-down實驗結果示例

gst pull down WB：Western blot檢測圖（陽性）

GST Pull-down MS：Western blot檢測圖

GST pulldown MS：質譜檢索表格（部分展示）

GST pulldown MS蛋白生信分析結果示例

GST pull down實驗服務客戶文章

1. DSS1 inhibits autophagy to activate epithelial-mesenchymal transition in a pro-metastatic niche of renal cell carcinoma. 2025. Nature Communications.  1區, IF=14.7. 【研究內容】：本研究發現：在轉移性透明細胞腎細胞癌（ccRCC）中，BRCA2在參與DNA修復時的關鍵輔因子DSS1蛋白表達上調，并促進了該腫瘤的生長和遠處轉移。Co-IP和GST pull down證實DSS1與LC3相互作用，通過TRIM 25介導的K63連接的LC3B-K51處的多聚泛素化，促進其降解。這損害了（宏觀）自噬通量并導致p62積累，從而穩定TWIST1并促進其核轉位，最終激活上皮-間充質轉化（EMT）。 使用相關技術: GST Pull-down WB、GST pull down實驗服務

2. Chen S.L. et al: A GYS2/p53 Negative Feedback Loop Restricts Tumor Growth in HBV-Related Hepatocellular Carcinoma. 2018. Cancer Research. 1區, IF=13.312. 【研究內容】：糖原合成酶2(GYS2)在HCC中的表達明顯下調，并與糖原含量降低和不良患者預后相關。本研究利用Co-IP和GST pull down等方法證明GYS2與MDM2競爭性結合，阻止MDM2介導的p53泛素化和降解；GYS2還增強了p300誘導的p53蛋白K373/382位點的乙酰化，進而負反饋抑制了HBx/HDAC1復合物支持下的GYS2轉錄，從而限制乙肝病毒相關性肝癌的生長。 使用相關技術: gst pulldown測定、GST-pull down質譜分析、GST標簽蛋白

3. Jiang L. et al: Bach1 Represses Wnt/β-Catenin Signaling and Angiogenesis. Circ Res. 2015，IF=14.467. 【研究內容】：Wnt/β-catenin信號在內皮細胞的血管生成活性中起重要作用。過表達實驗表明，轉錄因子Bach1過表達可抑制后肢缺血小鼠的血管生成，并抑制Wnt3a刺激的血管生成反應和人臍靜脈內皮細胞Wnt/β-catenin靶基因的表達。Co-IP實驗和gst pull-down分析表明，Bach1直接與TCF4結合，并減少β-catenin與TCF4的相互作用。研究揭示了Bach1抑制外周缺血損傷后的血管生成的作用機制，為血管生成治療或其他涉及Wnt/β-catenin通路異常調節的疾病提供了新的治療靶點。 使用相關技術: GST 融合蛋白、GST pull-down實驗、GST pull-down技術

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產品名稱	貨號和規格	產品說明書		價格
GST pull-down試劑盒	FI8804，20/40次	Fitgene-FI8804說明書		點擊詢價
His pull-down試劑盒	FI8805，20/40次	Fitgene-FI8805說明書

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GST pull-down試劑盒產品簡介

輝駿生物的GST pull-down試劑盒和His pull down試劑盒能夠高效調取GST融合蛋白或His融合蛋白在各類樣本中的互作蛋白。

在GST pull-down或His pull down實驗前，先通過基因工程技術手段將目標基因連入帶有GST標簽或His標簽的原核表達載體中，并導入大腸桿菌中進行原核表達。之后，GST融合蛋白通過GTH（ Glutathione）樹脂純化，His融合蛋白通過Ni-NTA 樹脂純化。最后，加入樣本裂解液孵育，樣本中與GST或His融合蛋白有相互作用的蛋白便可被吸附而分離。分離的蛋白產物既可以用Western blot檢測已知蛋白，也可以用質譜（LC-MS/MS）鑒定未知蛋白。

pull down試劑盒組分

Pull down試劑盒產品優勢*輝駿生物

1、調取效率高：GST融合蛋白與樹脂親和力強，可以高效純化目標蛋白及其互作蛋白；

2、適用范圍廣，優化的裂解液配方適用于動物、植物組織、微生物等各類型組織和細胞樣本；

3、洗脫液適配后續Western Blot及質譜（LC-MS/MS）實驗；

4、操作簡便，耗時短，適用于初學者。

pulldown試劑盒使用流程簡述

1. 通過原核表達系統表達帶有GST標簽或His標簽的融合蛋白；

2. 在細菌上清液中加入GST標簽親和純化樹脂或His標簽親和純化樹脂，4 ℃孵育2 小時；

3. 將待測樣本裂解液加入上述體系中，4 ℃孵育過夜；

4. 漂洗、洗脫得到目標蛋白及其互作蛋白復合物。

GST pull down試劑盒—客戶文章

1. DSS1 inhibits autophagy to activate epithelial-mesenchymal transition in a pro-metastatic niche of renal cell carcinoma. 2025. Nature Communications.  1區, IF=14.7.

1. Chen S.L. et al: A GYS2/p53 Negative Feedback Loop Restricts Tumor Growth in HBV-Related Hepatocellular Carcinoma. 2018. Cancer Research. 1區, IF=11.2. 

2. Yun F. et al: NOD2 reduces the chemoresistance of melanoma by inhibiting the TYMS/PLK1 signaling axis. 2024. Cell Death Dis. 1區, IF=9.6.

3. Yu C.P. et al: Flot2 acts as a novel mediator of podocyte injury in proteinuric kidney disease. 2023. Int J Biol Sci. 1區, IF=9.2.

4. You H. J. et al: Hepatitis B virus X protein promotes vimentin expression via LIM and SH3 domain protein 1 to facilitate epithelial-mesenchymal transition and hepatocarcinogenesis. Cell. 2021. Commun Signal. 2區, IF=8.4. 

5. Research note: The critical role of the interaction between Eimeria tenella invasion protein RON2 and host receptor annexin A2 in mediating parasite invasion. 2024. Poultry Science. 2區, IF=4.2. 

6. Lin J.M. et al: A positive feedback loop between ZEB2 and ACSL4 regulates lipid metabolism to promote breast cancer metastasis. 2023. eLife. 1區, IF=6.4.